学術論文

Doukyu N, Nihei S.Cholesterol oxidase with high catalytic activity from Pseudomonas aeruginosa: Screening, molecular genetic analysis, expression and characterization.
J Biosci Bioeng. 120(1):24-30. （2015）

Watanabe R, Doukyu N. Improvement of organic solvent tolerance by disruption of the lon gene in Escherichia coli.　J Biosci Bioeng. 2014, 118(2) 139-144

Ogino H, Inoue S, Yasuda M, Doukyu N. Hyper-activation of foldase-dependent lipase with lipase-specific foldase. J Biotechnol. 166(1-2):20-4　（2013）

Yamauchi Y, Minegishi H, Echigo A, Shimane Y, Kamekura M, Itoh T, Ohkuma M, Doukyu N, Inoue A, Usami R. Halarchaeum rubridurum sp. nov., a moderately acidophilic haloarchaeon isolated from commercial sea salt samples. Int J Syst Evol Microbiol. 63(Pt 9):3143-7.　（2013）

Watanabe, R and Doukyu, N. Contributions of mutations in acrR and marR genes to organic solvent tolerance in Escherichia coli. AMB Express 2：58　(2012)

Yamauchi Y, Minegishi H, Echigo A, Shimane Y, Shimoshige H, Kamekura M, Itoh T, Doukyu N, Inoue A, Usami R.　Halarchaeum salinum sp. nov., a moderately acidophilic haloarchaeon isolated from commercial sea salt.　Int J Syst Evol Microbiol. 63:1138-1142 (2012)

Doukyu, N., Ishikawa, K., Watanabe, R., Ogino, H. Improvement in organic solvent-tolerance by double disruptions of proV and marR genes in Escherichia coli. 112(3):464-474. J. Appl. Microbiol. (2012)

Sagermann, M., Ohtaki, A., Newton, K., Doukyu, N.　Structural characterization of the organic solvent-stable cholesterol oxidase from Chromobacterium sp. DS-1. 170（1）：32-40, J. Struct. Biol. (2010)

Ogino, H., Tsuchiyama, S., Yasuda, M., Doukyu, N. Enhancement of the aspartame precursor synthetic activity of an organic solvent-stable protease. Protein Eng Des Sel. 23(3):147-52（2010）

Doukyu, N. and Ogino, H. Organic solvent-tolerant enzymes. Biochem. Eng. J. 48: 270-282 (2010)

Doukyu, N. Characteristics and biotechnological applications of microbial cholesterol oxidases. Appl. Microbiol. Biotechnol. 83：825-837(2009)

Doukyu, N., Shibata, K., Ogino, H., Sagermann, M. Cloning, sequence analysis, and expression of a gene encoding Chromobacterium sp. DS-1 cholesterol oxidase. 82(3):479-490. Appl. Microbiol. Biotechnol. (2009)

Doukyu, N., Shibata, K., Ogino, H., Sagermann, M. Purification and characterization of Chromobacterium sp. DS-1 cholesterol oxidase with thermal, organic solvent, and detergent tolerance. Appl. Microbiol. Biotechnol. 80:59-70 (2008)

Doukyu, N., Yamagishi, W., Kuwahara, H., Ogino, H. A Maltooligosaccharide-Forming Amylase Gene from Brachybacterium sp. Strain LB25: Cloning and Expression in Escherichia coli. Biosci. Biotechnol. Biochem. 72:2444-2447 (2008)

Ogino, H., Inoue, S., Akagi, R., Yasuda, M., Doukyu, N. and Ishimi, K. Refolding of a recombinant organic solvent-stable lipase, which is overexpressed and forms an inclusion body, and activation with lipase-specific foldase. Biochem. Eng. J. 40:507-511 (2008)

Ogino, H., Nakayama, H., China, H., Kawata, T., Doukyu, N., Yasuda, M. Characterization of Recombinant Glyoxylate Reductase from Thermophile Thermus thermophilus HB27. Biotechnol. Prog. 24:321-325 (2008）

Ogino, H., Katou, Y., Akagi, R., Mimitsuka, T., Hiroshima, S., Gemba, Y., Doukyu, N., Yasuda, M., Ishimi, K., Ishikawa, H. Cloning and expression of gene, and activation of an organic solvent-stable lipase from Pseudomonas aeruginosa LST-03. Extremophiles.11:809-817 (2007)

Doukyu, N., Yamagishi, W., Kuwahara, H., Ogino, H., Furuki, N. Purification and characterization of a maltooligosaccharide-forming amylase that improves product selectivity in water-miscible organic solvents, from dimethylsulfoxide-tolerant Brachybacterium sp. strain LB25.Extremophiles. 2007 11:781-788 (2007)

Ogino, H., Uchiho, T., Doukyu, N., Yasuda, M., Ishimi, K., Ishikawa, H. Effect of exchange of amino acid residues of the surface region of the PST-01 protease on its organic solvent-stability. Biochem. Biophys. Res. Commun. 358:1028-1033 (2007)

Tsuchiyama, S., Doukyu, N., Yasuda, M., Ishimi, K., Ogino, H. Peptide Synthesis of Aspartame Precursor Using Organic-Solvent-Stable PST-01 Protease in Monophasic Aqueous-Organic Solvent Systems. Biotechnol. Prog. 23:820-823 (2007)

Ogino, H., Gemba, Y., Yutori, Y., Doukyu, N., Ishimi, K., Ishikawa, H. Stabilities and conformational transitions of various proteases in the presence of an organic solvent. Biotechnol. Prog. 23:155-161 (2007)

Takeda, Y., Aono, R., Doukyu, N. Purification, characterization, and molecular cloning of organic-solvent-tolerant cholesterol esterase from cyclohexane-tolerant Burkholderia cepacia strain ST-200. Extremophiles. 10:269-277（2006）

Shimizu, K., Hayashi, S., Doukyu, N., Kobayashi, T., and Honda, H. Time-course data analysis of gene expression profiles reveals purR Regulation concerns in organic solvent tolerance in Escherichia coli. J. Biosci. Bioeng. 99:72-74.（2005）

Shimizu, K., Hayashi, S., Kako, T., Suzuki, M., Tsukagoshi, N., Doukyu, N., Kobayashi, and T., Honda, H. Discovery of glpC, an organic solvent tolerance-related gene in Escherichia coli, using gene expression profiles from DNA microarrays. Appl. Environ. Microbiol. 71:1093-1096（2005）

Shibuya, A., Tsukagoshi, N., Ohtsu, I., Doukyu, N., and Aono, R. Convenient and sensitive evaluation of a superoxide anion-generating reagent methyl viologen by Escherichia coli harboring a soxS’::gfp reporter plasmid. Biosci. Biotechnol. Biochem. 68:2637-2639 (2004)

Ohtsu, I., Kakuda, N., Tsukagoshi, N., Doukyu, N., Takagi, H., Wachi, M., Aono, R. Transcriptional analysis of the ostA/imp gene involved in organic solvent sensitivity in Escherichia coli. Biosci. Biotechnol. Biochem. 68:458-461(2004)

Doukyu, N., Kuwahara, H. and Aono, R Isolation of Paenibacillus illinoisensis which produces organic solvent tolerant-cyclodextrin glucanotransferase. Biosci. Biotechnol. Biochem. 67: 334-340 (2003)

Doukyu, N., Toyoda, K. and Aono, R. Indigo production by Escherichia coli carrying phenol hydroxylase gene from Acinetobacter sp. strain ST-550 in a water-organic solvent two phase system. Appl. Microbiol.Biotechnol. 60:720-725 (2003)

Doukyu, N., Nakano, T., Okuyama, Y. and Aono, R. Isolation of an Acinetobacter sp. ST-550 which produces a high level of indigo in a water-organic solvent two-phase system containing high levels of indole. Appl. Microbiol. Biotechnol. 58:543–546 (2002)

Aunpad, R., Muench, S. P., Baker, P. J., Sedelnikova, S., Panbangred, W., Doukyu, N. Aono R. and Rice, D. W. Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies on the class II cholesterol oxidase containing bound flavin from Burkholderia cepacia. Acta. Crystallogr. D. 58:2182-2183 (2002)

Doukyu, N., and Aono, R. Cloning, sequence analysis and expression of a gene encoding an organic solvent- and detergent-tolerant cholesterol oxidase of Burkholderia cepacia strain ST-200. Appl. Microbiol. Biotechnol. 57:146-152 (2001)

Doukyu, N., and Aono, R. Two moles of O2 consumption and one mole of H2O2 formation with cholesterol peroxidation by cholesterol oxidase from Pseudomonas sp. ST-200. Biochem. J. 341:621-627 (1999)

Suzuki, Y., Doukyu, N., and Aono, R. Lithocholic acid side-chain cleavage to produce 17-keto or 22-aldehyde steroids by Pseudomonas putida strain ST-491 grown in the presence of organic solvent, diphenyl ether. Biosci. Biotechnol. Biochem. 62:2182-2188 (1998)

Doukyu, N., and Aono, R Purification of extracellular cholesterol oxidase with high activity in the presence of organic solvents from Pseudomonas sp. ST-200. Appl. Environ. Microbiol. 64:1929-1932 (1998)

Doukyu, N., Arai, T. and Aono, R. Effects of organic solvents on indigo formation by Pseudomonas sp. strain ST-200 growth with high levels of indole. Biosci. Biotech. Biochem. 62:1075-1080 (1998)

Doukyu, N., and Aono, R. Biodegradation of indole at high concentration by persolvent fermentation with Pseudomonas sp. ST-200. Extremophiles. 1:100-105 (1997)

Doukyu, N., Kobayashi, H., Nakajima, H., and Aono, R. Control with organic solvents of efficiency of persolvent fermentation by Pseudomonas sp. strain ST-200. Biosci. Biotech. Biochem. 60:1612-1616 (1996)

Aono, R., and Doukyu, N. Stereospecific oxidation of 3b-hydroxysteroids by persolvent fermentation with Pseudomonas sp. ST-200. Biosci. Biotech. Biochem. 60:1146-1151 (1996)

Aono, R., Doukyu, N., Kobayashi, H., Nakajima, H., and Horikoshi, K. Oxidative Bioconversion of cholesterol by Pseudomonas sp. strain ST-200 in a water-organic solvent two-phase system. Appl. Environ. Microbiol. 60:2518-2523 (1994)

著書・総説
著書

今中忠行監修　、道久則之（分担）『極限環境生物の産業展開』　第7章　有機溶媒生物圏　3.疎水性有機溶媒耐性微生物の耐性機構と応用　シーエムシー出版　2012年8月 p.131-139

植田充美監修、道久則之（分担）『合成生物工学の隆起―有用物質の新たな生産法構築をめざして―』第7章　有機溶媒耐性大腸菌の溶媒耐性機構と応用　シーエムシー出版　2012年3月 p.236-244

N. Doukyu, Chapter title: Organic solvent-tolerant microorganisms, Title of contribution: Genetics, evolution and applications, Extremophiles Handbook, K. Horikoshi, G. Antranikian, A. T. Bull, F. T. Robb, K.O. Stetter (Eds.), Springer, 8.4, 991-1011 (2010)

青野力三、道久則之　（分担）: 微生物利用の大展開 : 疎水性溶媒耐性微生物-溶媒耐性機構と溶媒重層発酵) p.158-164, エヌ・ティー・エス, 東京 (2002)

道久則之, 青野力三（分担）: 特殊環境微生物の検索 : 生物工学実験書 (日本生物工学会編) 127-130, 培風館, 東京 (2002)

総説等

Doukyu N.　Novel cholesterol oxidases which were found in the studies of applications of organic solvent-tolerant bacteria. 有機溶媒耐性菌の応用研究から見出された新規なコレステロール酸化酵素に関する研究　 Journal of Japanese Society for Extremophiles vol.10, 13-16(2011)

道久則之　「疎水性有機溶媒に対する大腸菌の耐性機構」　生物工学会誌　第89巻5号p.239-241（2011）

道久則之,　熱・界面活性剤・有機溶媒耐性のコレステロールオキシダーゼ,　バイオサイエンスとインダストリー 66巻,12号, 667-670 (2008)

道久則之： 有機溶媒耐性微生物の利用：極限微生物学会誌　第2巻2号 p.12 (2003)

道久則之, 青野力三: 有機溶媒耐性微生物の検索と利用 :バイオサイエンスとインダストリー 61巻1号, 17-22, (2003)

学会発表（2011-2013）

石川誠、道久則之、「Rhodococcus erythropolis 由来コレステロールオキシダーゼの大腸菌による発現」極限環境微生物学会2013年度年会、明治大学（2013年10月26日-27日）

Noriyuki Doukyu, Organic solvent-tolerant bacteria and enzymes, Indian JSPS Alumni Association Seminar, Bhubaneswar, India, 13th August, 2013

渡邉玲、道久則之、「大腸菌の高度有機溶媒耐性化の解明」極限環境微生物学会2012年度年会、日本大学（2012年12月1日-2日）

道久則之、二瓶翔「Pseudomonas aeruginosa 由来コレステロールオキシダーゼの解析」極限環境微生物学会2012年度年会、日本大学（2012年12月1日-2日）

R. Watanabe, N. Doukyu Improvement in organic solvent-tolerance by double mutations of acrR and marR genes in Escherichia coli, 9th International congress on Extremophiles, Sevilla, Spain (2012年9月10-13日)

渡邉玲、道久則之、「大腸菌のacrR およびmarR 遺伝子の変異による疎水性有機溶媒耐性の向上」極限環境微生物学会2011年度年会、長崎大学（2011年11月27日-28日）

二瓶翔、道久則之、「組換え大腸菌によるPseudomonas aeruginosa 由来コレステロールオキシダーゼの生産」極限環境微生物学会2011年度年会、長崎大学（2011年11月27日-28日）

小野奈津美、道久則之、「Chromobacterium　sp. DS-1 株由来コレステロールオキシダーゼの触媒部位の解析」極限環境微生物学会2011年度年会、長崎大学（2011年11月27日-28日）

渡邉玲、道久則之、「大腸菌の疎水性有機溶媒耐性向上に関与する遺伝子の解析」日本農芸化学会2011年度関東支部大会、東洋大学　板倉（2011年10月15日）

競争的研究資金

科研費　基盤研究(C), 「高度な安定性を有するコレステロール酸化酵素の触媒機構の解明と高活性化」　代表平成24-平成27年年度

科研費　若手B 「グラム陰性細菌由来新規コレステロール酸化酵素の高度安定化機構の解明」　代表　平成21-23年度　

科研費　若手B 「有機溶媒耐性大腸菌を用いた有機溶媒耐性生体触媒の開発」　代表　平成17-18年度

平成17年度産業技術研究助成事業費助成金（独立行政法人新エネルギー・産業技術総合開発機構, NEDO）「非水系バイオプロセスで用いられる有機溶媒耐性生体触媒の開発」　道久則之（分担） 代表：(荻野博康, 大阪府立大学) 　平成17年7月-平成20年6月